【求助】石蜡切片染色前黑色素的预处理方法?

newflint

丁香园VIP站友

请教大家,在做皮肤标本的免疫组化,发现空白石蜡片上就有颜色,类似于DAB显色后的浅棕色,位于基底层,这是什么东东?是色素吗?怎么消除呢?恳请指点,谢啦!
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wanliheng edited on 2010-05-07 09:04 举报
wanliheng

丁香园版主

空白石蜡片指的是什么意思啊?一般来讲脱蜡至水以后片子上就没有石蜡了呀。请描述的再清楚一些。
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newflint

丁香园VIP站友

空白石蜡片就是指刚从石蜡块上切下的厚5微米的,贴到载玻片上的片子,烤过片,但还没经过脱蜡至水等步骤,就是还没开始做实验的。
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lokishu

丁香园准中级站友

没有关系的,是皮肤毛囊的色素沉着,不影响实验结果。
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newflint

丁香园VIP站友

谢谢lokishu!但我的目的蛋白也在这个地方表达,看结果的时候有干扰。有什么办法可以把色素消除吗?
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董学易7235202
我觉的是皮肤组织中的色素沉着,是黑色素吗?如果是黑色素,可以在组织切片水化结束后,先用高锰酸钾氧化5分左右,再用蒸馏水冲洗后,加2%草酸作用1分左右,蒸馏水冲洗后接着抗原修复等步骤。
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董学易7235202
或者你换另外一种显色剂,该显色剂的颗粒不是棕黄色,应该是碱性磷酸酶标记的,而不是辣根过氧化物酶标记,细节你再查一下文献。
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wanliheng

丁香园版主

今天看书,无意间发现切片染色前的预处理中哟关于脱去黑色素颗粒的方法。
供你参考:

脱去黑色素颗粒 有些组织内含有一些黑色素颗粒,例如皮肤表皮、眼球的视网膜,有时会影响这些部位的组织结构或者某些细胞的观察,这就需要在染色前去除黑色素。

具体操作:
1)石蜡切片,脱蜡至水(一定要是蒸馏水)
2)0.25%高锰酸钾水溶液,1-3小时
3)蒸馏水洗,1分钟
4)5%草酸水溶液,30分钟
5)流水洗2-3分钟,蒸馏水浸洗3分钟
6)常规染色

参考:形态学实验技术,赵荧 唐军民 主编,北京大学医学出版社2008,p107,
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newflint

丁香园VIP站友

非常感谢大家,我试试去,有好结果一定通知各位!
版主wanliheng留言:
期待下一步的精彩!
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wanliheng edited on 2010-05-19 14:33 举报